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ELISA實驗四種常用的方法優(yōu)點與缺點
更新時間：2024-10-14 點擊次數(shù)：88次 ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體，形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質，作用后產生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。以下是ELISA實驗四種常用的方法優(yōu)點與缺點分析比較：
1、直接法
優(yōu)點：操作簡單快捷，步驟少，實驗周期更短，避免了交叉反應，測定結果不容易出錯
缺點：酶標記抗體成本高，不是所有抗體都適用
2、間接法
優(yōu)點：高靈敏度，更經濟，更靈活，利用了酶標二抗，信號得到放大
缺點：可能存在交叉反應，實驗周期較長
3、雙抗體夾心法
優(yōu)點：高特異性和高靈敏度，能夠與復雜的樣品基質兼容，一步法和二步法各有特點，一步法操作簡便但易出現(xiàn)非特異性干擾，二步法可以減少非特異性干擾，提高實驗的準確性
缺點：實驗流程較長，需要使用酶標抗體和固相載體，成本較高
4、競爭法
優(yōu)點：適用于小分子抗原，數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高
缺點：整體的敏感性和特異性都較差，需要對樣本進行稀釋.
