人IL-23 ELISA試劑盒:IL-23和再生障礙貧血關(guān)系
更新時間：2015-09-17 點擊次數(shù)：1420次上海信帆生物代理銷售人IL-23 ELISA試劑盒，人IL-17 ELISA試劑盒，人IL-6 ELISA試劑盒，人IL-8 ELISA試劑盒。現(xiàn)在我們來看看IL-17，IL-23和再生障礙貧血的關(guān)系.
再生障礙性貧血(Aplastic Ahemia，AA)是一種骨髓造血衰竭癥，是由化學(xué)、物理、生物因素、藥物及其他多種原因?qū)е碌脑煅杉毎臄?shù)量減少或是功能異常，從而引起外周血白細胞、紅細胞和血小板減少的一種綜合征。從患者絕大部分為后天獲得性，導(dǎo)致從發(fā)生的確切原因尚不明了，大多數(shù)再障患者無明顯誘因，其中約70％患者的機體免疫調(diào)節(jié)機制紊亂在發(fā)病機制中起重要的作用。
大量的研究表明，從是一種以造血組織為靶細胞的自身免疫性疾病，細胞介導(dǎo)的免疫損傷可能是再生障礙性貧血的主要發(fā)病機制之一，造血衰竭的發(fā)生與T淋巴的數(shù)量及功能的異常有密切的關(guān)系。T細胞是機體免疫系統(tǒng)中的主要效應(yīng)細胞，它通過對抗原的識別、處理、遞呈等作用構(gòu)成多種細胞因子同多種細胞之間的網(wǎng)絡(luò)，維持機體免疫功能的生理狀態(tài)。輔助性T淋巴細胞(T helpercell，Th)對于機體的特異性和非特異性免疫，以及對細胞免疫和體液免疫的調(diào)節(jié)均有重要的作用。Th細胞亞型Th1和Th2之間的平衡是維持機體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基礎(chǔ)。據(jù)研究報道，再障患者體內(nèi)Th1細胞處于優(yōu)勢，骨髓中優(yōu)勢表達Th1型細胞因子。Th1細胞及其分泌的細胞因子在再障的發(fā)病中起著重要的作用。
白介素-12(Interleukin-12，IL-12)是由p35和p40兩個亞基組成的異二聚體，在Th1免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。IL-12主要由單核巨噬細胞和樹突狀細胞(Dendritic Cell，Dc)產(chǎn)生，通過與受體IL-12R β 1/IL-12R β 2結(jié)合發(fā)揮作用。IL-12能促進細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic T cell，CTL)的細胞毒作用和增強自然殺傷(Nature Killer，NK)細胞的殺傷作用，促進T細胞、NK細胞和CTL的增殖和活化，Th細胞類型的轉(zhuǎn)化，INF(Interferon)-γ、TNF-α(Tumornecrosis factol-α)和IL-6的大量生成，促進Thl反應(yīng)，增強免疫應(yīng)答；IL-12在自身免疫性疾病如糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和克隆氏病等多種Thl細胞介導(dǎo)的疾病中發(fā)揮作用。IL-23是一種新發(fā)現(xiàn)的細胞因子，它和IL-12一樣，也是異二聚體結(jié)構(gòu)，和11-12共用p40亞單位，另一個較小的亞單位為p19，結(jié)構(gòu)上和p35相似。IL-23主要由抗原提呈細胞(antigen presenting cell，APC)分泌，其他的一些細胞如活化的巨噬細胞以及極化的Thl細胞也能產(chǎn)生IL-23。IL-23也通過與受體結(jié)合發(fā)揮作用，從而誘導(dǎo)Th1細胞的分化以及INF-Y的產(chǎn)生。近期的研究證實IL-23在自身免疫性疾病的發(fā)生和維持中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。目前IL-23誘導(dǎo)自身免疫性疾病的作用機制還不*清楚，但大量的研究顯示IL-17是其發(fā)揮生物學(xué)作用的重要效應(yīng)因子之一。
IL-17是IL-17家族的重要成員之一，是重要的促炎癥細胞因子，主要由活化的T細胞分泌。它具有多重生物活性，不僅可以誘導(dǎo)中性粒細胞的增殖、成熟和趨化；還可以促進多種細胞產(chǎn)生TNF、IL-1、IL-6、IL-8、粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)等促炎癥細胞因子。 環(huán)孢素A(Cyclosporine A，CsA)是目前上廣泛應(yīng)用的一種免疫抑制劑，主要用于自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的防治。近年來，CsA用于治療再障、銀屑病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、實驗性腦脊髓膜炎等自身免疫性疾病，成為治療多種自身免疫反應(yīng)性疾病的常規(guī)用藥。目前，雖然國內(nèi)外對CsA的作用機制及其對淋巴細胞的分化及細胞因子產(chǎn)生并分泌的作用均有一些報道，但其確切的研究機制尚不清楚。
IL-12和IL-23均在免疫反應(yīng)中起到重要的調(diào)節(jié)作用，兩者的表達異常與免疫介導(dǎo)的疾病有關(guān)。因此，尋找一種針對這兩個因子的藥物也許能夠用來治療包括再障在內(nèi)的免疫性疾病。近年來，針對兩者共用亞基的單克隆抗體已經(jīng)應(yīng)用于銀屑病、克隆性腸病的實驗室和研究，顯示了較好的療效。IL-12p40mAb是針對IL-12和IL-23共同亞基p40的單克隆抗體，能夠與p40亞基結(jié)合，從而阻斷IL-12和11-23與受體的結(jié)合，中和11-12和IL-23的生物學(xué)活性。已有一些研究表明，這種抗體對某些免疫介導(dǎo)的疾病有治療作用。 目的： 從基因和蛋白水平研究IL-12和IL-23在再障中的表達以及它們對再障患者Th1和Th2細胞因子產(chǎn)生的影響，IL-17在再障患者中的表達及IL-23/IL-17通路在再障中的作用。環(huán)孢素A對再障患者中IL-12和IL-23的產(chǎn)生以及IL-23/L-17通路的影響。IL-12p40mAb對IL-12和IL-23在再障患者中作用的影響，進一步了解再障的發(fā)病機制，從而為治療再障提供一種新的途徑。
方法： (1)運用實時定量PCR法檢測IL-12p40，IL-12p35和IL-23p19mRNA在再障患者骨髓單個核細胞(BMMNCs)和外周血單個核細胞(PBMCs)中的表達。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測IL-12和IL-23在再障患者骨髓和外周血上清中的水平。 (2)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，加或不加SAC刺激48小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-12和IL-23的濃度。 (3)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，用抗CD3和CD28單克隆抗體刺激的同時加入或不加rIL-12或rIL-23，刺激72小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中INF-γ和IL-4的濃度。 (4)運用實時定量PCR法檢測IL-17mRNA在再障患者骨髓單個核細胞(BMMNCs)和外周血單個核細胞(PBMCs)中的表達。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測IL-17在再障患者骨髓和外周血上清中的水平。 (5)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，用抗CD3和CD28單克隆抗體刺激的同時加入或不加rIL-12或rIL-23，刺激72小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-17的濃度。 (6)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，在SAC刺激同時加入或不加環(huán)孢素A培養(yǎng)48小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-12和IL-23的濃度。 (7)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，用抗CD3+CD28單克隆抗體+rIL-23刺激的同時加入或不加環(huán)孢素A，刺激72小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-17的濃度。 (8)用密度梯度離心法分離再障患者和正常人的PBMCs，用抗CD3+CD28單克隆抗體+rIL-12/rIL-23刺激的同時加入或不加IL-12p40mAb，刺激72小時，ELISA檢測培養(yǎng)上清中INF-γ,TNF-α和IL-17的濃度。
結(jié)果： (1)再障患者BMMNCs和PBMCs中IL-12p40，IL-12p35和IL-23p19mRNA的表達與正常對照相比均增高， IL-12和IL-23在骨髓上清和外周血上清中的水平也比正常對照組高。 (2)SAC刺激后，IL-12和IL-23在再障和正常人中的表達均增高，并且再障患者的增加顯著高于正常人。 (3)多克隆刺激的PBMCs能夠產(chǎn)生INF-γ，IL-12和IL-23能夠增強INF-γ的產(chǎn)生，并且IL-12的作用較強；與正常對照相比，再障患者的PBMCs能夠產(chǎn)生較多的INF-γ。而IL-12和IL-23對對正常對照和再障患者的PBMCs中IL-4的產(chǎn)生則無影響。 (4)再障患者BMMNCs和PBMCs中IL-17mRNA的表達均比正常對照高。IL-17在骨髓和外周血上清中的水平也升高。 (5)多克隆刺激的PBMCs能夠產(chǎn)生IL-17，IL-23能夠明顯增強IL-17的產(chǎn)生，且與正常對照相比，再障患者的PBMCs能夠產(chǎn)生較多的IL-17。而IL-12對IL-17的產(chǎn)生無明顯影響(6)CsA可抑制體外SAC誘導(dǎo)的PBMCs產(chǎn)生IL-12和IL-23，并且還可抑制IL-23誘導(dǎo)的IL-17的產(chǎn)生。 (7)IL-12p40mAb能夠抑制IL-12和IL-23誘導(dǎo)的多克隆刺激的PBMCs產(chǎn)生INF-γ和TNF-α.并且，IL-12p40mAb也能影響IL-23誘導(dǎo)的IL-17的分泌。
結(jié)論： 在再障患者中，IL-12和IL-23在基因和蛋白水平都是上調(diào)的。再障患者中上調(diào)的IL-12和IL-23能夠促進INF-γ的產(chǎn)生，從而促進Th1型免疫反應(yīng)。IL-17在再障患者中的表達也是增高的，rIL-23能夠誘導(dǎo)再障患者PBMCs產(chǎn)生IL-17，說明再障患者中上調(diào)的IL-23也能通過誘導(dǎo)IL-17的產(chǎn)生從而在再障中發(fā)揮作用。CsA可抑制體外SAC誘導(dǎo)的PBMCs產(chǎn)生IL-12和IL-23，并且還可抑制IL-23誘導(dǎo)的IL-17的產(chǎn)生。說明CsA對再障的治療作用也可能是通過抑制IL-12，IL-23及IL-23/IL-17通路實現(xiàn)的。IL-12p40mAb能夠阻斷IL-12和IL-23誘導(dǎo)的細胞因子的分泌，從而為治療AA提供一種新的途徑。
