- 簡介：
- (matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視。
- 檢測原理：
- (Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測，如果小膠加樣孔為10~15個，則總計可檢測500~750個樣品。
- 檢測目的:
- 測MMP-2、MMP-9 酶譜及活性（Detect MMP2 and MMP9 as low as 1nM）。
4. 試劑盒組成與儲存： A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml , −20 ºC； B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC； C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋； D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋； E. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液, 4 ºC。 |
