免疫組化實(shí)驗(yàn)過程中操作的要領(lǐng)是什么
更新時間：2015-07-06 點(diǎn)擊次數(shù)：1198次我們在做免疫組化實(shí)驗(yàn)的時候，總是會遇到這樣那樣的問題，上海信帆生物科技有限公司告訴大家免疫組化實(shí)驗(yàn)過程中操作的要點(diǎn)具體是什么？
1.固定：用 4% 的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。 有時候商品化的抗體會有比較適合而的固定液，請于購置前注意說明書。
Bouin S 固定液：飽和苦味酸 750ml ，甲醛 250ml ，冰醋酸 50ml ，其對組織的穿透力較強(qiáng)，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標(biāo)本的保存。
PLP 液：即高碘酸鈉 - 賴氨酸 - 多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。
2 ．組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。
3 ．切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當(dāng)?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?nbsp;
4 ．烤片： 60℃ 30 分鐘或 37℃ 過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。
5 ．蠟塊及切片的保存：在 4℃ 保存
6 ．脫片問題： Poly-L-Lysine( 多聚賴氨酸 ) 為目前免疫組化染色工作中zui常用的一種防脫片劑， 6ml 的多聚賴氨酸溶液可按 1:10 稀釋成 60ml 的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理（ APES 和 Poly-L-Lysine ）的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在 APES 1 ： 50 丙酮溶液中浸泡 3 分鐘，晾干，即可進(jìn)行下一步。
7 ．滅活內(nèi)源性酶： HRP 系統(tǒng)： 3% 雙氧水滅活； AP 系統(tǒng)： 3%HAc 滅活。
8 ．暴露抗原：對于石蠟切片的免疫組化實(shí)驗(yàn)時，必須采用高溫加熱抗原修復(fù)，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強(qiáng)度 ( 不同抗體的*修復(fù)液請參閱抗體說明書 ) 。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應(yīng)不一樣，可進(jìn)行熱修復(fù)、胰酶消化、既不修復(fù)也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。
9 ．封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強(qiáng)時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉
10 ．抗體稀釋：應(yīng)遵循 “ 現(xiàn)用現(xiàn)配 " 的原則，對于 PBS 稀釋的抗體一定要當(dāng)天使用。
11 ．背景高：在抗體濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含 1‰ Tween20 的 PBS 洗，特別是在顯色之前要多洗。
12 ．返藍(lán)：在蘇木素復(fù)染后，可用堿性緩沖液（如 PBS ）或 Na2HPO4 的飽和溶液返藍(lán)。
13 ．顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。
