人孕酮（P）elisa檢測試劑盒實驗原理！
更新時間：2017-12-28 點擊次數(shù)：1077次人孕酮(P)elisa檢測試劑盒實驗原理！
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人孕酮(P)水平。用純化 的人孕酮(P)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中 依次加入孕酮(P)，再與 HRP 標記的孕酮(P)抗 體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮(P)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標 準曲線計算樣品中人孕酮(P)濃度。
人孕酮(P)elisa檢測試劑盒實驗原理！
實驗步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
1600 pmol/L | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
800 pmol/L | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
400 pmol/L | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
200 pmol/L | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
100 pmol/L | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
人孕酮(P)elisa檢測試劑盒實驗原理！
