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丁酰膽堿酯酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理：丁酰膽堿酯酶水解丁酰膽堿生成膽堿及乙酸,膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成TNB黃色化合物,根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量,水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可以反應(yīng)膽堿酯酶的活力。

丁酰膽堿酯酶是由肝臟合成的一種非特異性酯酶，由于該酶在肝臟中合成后立即釋放到血漿中，因此血清中BuChE活性是測(cè)定肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成功能的靈敏指標(biāo)。

丁酰膽堿脂酶又?jǐn)M稱膽堿酯酶、假性膽堿酯酶和血清膽堿酯酶。它是由肝臟細(xì)胞合成分泌進(jìn)入血液的，主要分布在肝臟、血清和淋巴液中。丁酰膽堿脂酶蛋白為四聚體，四個(gè)亞基的結(jié)構(gòu)*一樣，各包括574個(gè)氨基酸，每個(gè)亞基還結(jié)合9條糖鏈，占亞基相對(duì)分子質(zhì)量的23.9%。丁酰膽堿脂酶屬于B酯酶，在有機(jī)磷的解毒中發(fā)揮了重要作用，通過(guò)和有機(jī)磷結(jié)合，減少了血中可和丁酰膽堿脂酶結(jié)合的游離的有機(jī)磷，從而減輕丁酰膽堿堆積造成的中毒癥狀，起到了間接的解毒作用

丁酰膽堿酯酶水解丁酰膽堿生成膽堿及乙酸，膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成TNB黃色化合物，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量，水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可以反應(yīng)膽堿酯酶的活力。

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、快速簡(jiǎn)便：全程約30分鐘，可測(cè)48例左右樣本。
2、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個(gè)月有效。
3、靈敏度高：微量樣品即可測(cè)出丁酰膽堿酯酶的水平，可以分型，另有配套試劑盒可測(cè)乙酰膽堿酯酶。 4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.6%。
5、回收試驗(yàn)： X =98%。
6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血液（血清 /血漿 /全血）、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞各種水產(chǎn)，效果均佳。
所需儀器及自備試劑：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為412nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、漩渦混勻器
4、微量移液器

樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測(cè)定。
紅細(xì)胞：需按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后直接測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。

操作流程：
1、按步驟加入樣本和R2、R3
2、漩渦混勻，37℃孵育6分鐘
3、加入R4、R5、R6，室溫靜置15分鐘
4、412nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑，比色
丁酰膽堿酯酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)