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胃蛋白酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理： 
胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。 
胃蛋白酶（英文名稱(chēng)：Pepsin）是一種消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主細(xì)胞（gastric chief cell）所分泌，功能是將食物中的蛋白質(zhì)分解為小的肽片段。主細(xì)胞分泌的是胃蛋白酶原，胃蛋白酶原經(jīng)胃酸或者胃蛋白酶刺激后形成胃蛋白酶，胃蛋白酶不是由細(xì)胞直接生成的。
胃蛋白酶原由胃底主細(xì)胞分泌，在PH 1.5-5.0條件下，被活化成胃蛋白酶，將蛋白質(zhì)分解為胨，一部分被分解為酷氨酸、苯丙酸等氨基酸。胃液胃蛋白酶測(cè)定可用于鑒別神經(jīng)性低酸癥和胃性低酸癥，當(dāng)胃酸過(guò)少或缺乏時(shí)，前者胃蛋白酶的含量有時(shí)正常而后者鹽酸與胃蛋白酶同時(shí)缺乏。一般認(rèn)為胃性低酸癥是由于胃粘膜的重癥器質(zhì)性變化所致，研究具有重要的參考意義。胃癌、性胃炎、慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二脂腸炎、惡性貧血以及功能減退等胃蛋白酶的分泌常減少。一般胃酸基礎(chǔ)分泌高的，如十二脂腸潰瘍等，胃蛋白酶活性增高。
胃蛋白酶可水解蛋白產(chǎn)生含酚的氨基酸，而酚試劑可被含酚的氨基酸還原成藍(lán)色物質(zhì)，通過(guò)比色可測(cè)定胃蛋白酶活力。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放1個(gè)月有效。
2、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
3、回收試驗(yàn)： X =104%。
4、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
5、測(cè)試范圍：可測(cè)動(dòng)物胃液、組織等。
所需儀器及自備試劑：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為660nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
胃液: 先做預(yù)試，再根據(jù)活力大小進(jìn)行取樣操作
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程：
1、按步驟加入樣本和R1、R2, 37℃準(zhǔn)確水浴10分鐘
2、測(cè)定管加入R1, 37℃水浴10分鐘，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
3、取上清加R3、R4,37℃水浴20分鐘
4、660nm波長(zhǎng)，1cm光徑，比色

胃蛋白酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)