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植物總酚實驗代測

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：植物酚類物質具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用而廣泛應用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領域。
測定原理：在堿性條件下，酚類物質將鎢鉬酸還原，產生藍色化合物，在760nm處有特征吸收峰，測760nm處的吸光值，即可得樣品總酚含量。
自備實驗及儀器：天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配置：提取液：60%乙醇，自備。 
試劑一：液體3mL×1瓶，4℃保存。 試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。
總酚提取：將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.1g，加入2.5mL提取液，60℃振蕩提取2h。10000g，25℃，離心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待測
注意事項：1. 吸光值大于2，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。 2. 試劑一對皮膚有一定的刺激性，請操作時做好防護措施。 3. 低檢出限為2.4 μg/g。
總酚含量計算公式：a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下 標準曲線：y = 5.615x+0.0012，R2 = 0.9994 
總酚含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0012 ）÷5.615×V樣÷（V樣÷V樣總×W）                      = 0.445×（ΔA–0.0012 ）÷W 
V樣總：加入提取液體積，2.5 mL； V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應中樣品體積，0.01mL；W：樣品質量，g b.用96孔板測定的計算公式如下 
標準曲線：y = 2.808x+0.0012，R2 = 0.9994 
總酚含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0012 ）÷2.808×V樣÷（V樣÷V樣總×W）                      = 0.89×（ΔA–0.0012 ）÷W 
V樣總：加入提取液體積，2.5 mL； V樣：反應中樣品體積，0.01mL；W：樣品質量，g

植物總酚實驗代測