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硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶（TPX）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科），酶（二級(jí)學(xué)科）
測(cè)定意義：TPX屬于過(guò)氧化物酶家族,在體內(nèi)主要通過(guò)還原過(guò)氧化氫和一些氫過(guò)氧化物來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化作用,功能與GPX類似,也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內(nèi)。如酵母、植物、動(dòng)物、原生動(dòng)物、寄生蟲、細(xì)菌和古細(xì)菌,在進(jìn)化上高度保守。TPX與細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡及腫瘤發(fā)生調(diào)控密切相關(guān)。TPX的主要功能包括細(xì)胞脫毒、抗調(diào)節(jié)由過(guò)氧化氫介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)。
測(cè)定原理：TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長(zhǎng)為240nm,通過(guò)測(cè)定240nm吸光度的下降速率,通過(guò)對(duì)照減去過(guò)氧化氫酶(CAT)催化分解的H2O2,即可計(jì)算出TPX活性。因此，本試劑盒可以同時(shí)測(cè)定樣品TPX和CAT活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
粗酶液提取：1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3、血清等液體:直接測(cè)定

硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶（TPX）實(shí)驗(yàn)代測(cè)