溶-菌酶（LZM）測(cè)定試劑盒

（比濁法）

本所比濁法測(cè)定溶-菌酶活性方法主要有三種：

1、自身對(duì)照法（附錄 I）：適用于樣本數(shù)量較少，或者樣本有混濁或有顏色（如血液紅色、勻漿液濁度等）；

2、空白對(duì)照法（附錄 II）：適用于樣本量多且樣本比較澄清透明；

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法（附錄 III）：適用范圍同空白對(duì)照法。

一、測(cè)定原理：

在一定濃度的混濁菌液中，由于溶-菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞

壁上肽聚糖使細(xì)菌裂解而濃度降低，透光度增強(qiáng)，故可以根

據(jù)透光度變化來(lái)推測(cè)溶-菌酶的含量。

二、試劑組成及配制 (30T/28 樣)

1、試劑組成：

試劑一：菌粉，5mg×4 支，2～8℃干燥保存，有效期 6 個(gè)月。

試劑二：菌粉溶劑，100mL×1 瓶，2～8℃保存，并每月放

微波爐中溫消毒 20 秒，有效期 6 個(gè)月。

試劑三：標(biāo)準(zhǔn)品，粉劑 2mg×1 支（活力為 8 萬(wàn)單位/mg），2～

8℃干燥保存，有效期 6 個(gè)月。

[注]：試劑盒嚴(yán)格按照上述方法保存有效期可延至一年。

2、試劑配制：

（1）、貯備菌液的配制：

取 5mg/支的菌粉 1 支，倒入勻漿管中，加菌粉

溶劑 1mL，輕輕緩慢上下旋轉(zhuǎn)研磨 3 分鐘（切勿濺

出），即為貯備菌液，將其取出后置 2～8℃冰箱密

封保存一周左右。

（2）、應(yīng)用菌液的配制：

按貯備菌液:菌粉溶劑=1:19 進(jìn)行配制，需多少配

多少。剩下的應(yīng)用菌液 2～8℃可保存一周左右。最

好是現(xiàn)用現(xiàn)配，用時(shí)搖勻。

（3）、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：

①、標(biāo)準(zhǔn)品貯備液的配制：

每支準(zhǔn)確加雙蒸水 1.0mL 配成 2mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品

貯備液。2～8℃可保存 7～10 天。

②、標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：

臨用時(shí)按標(biāo)準(zhǔn)品貯備液∶雙蒸水=1∶799 比例稀

釋成 2.5µg/mL（即 200U/mL）的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，需多

少配多少。2～8℃保存，可保存 7～10 天。

附錄Ⅰ：自身對(duì)照法測(cè)定溶-菌酶

（適用于樣本數(shù)量較少，或者樣本有混濁或有顏色，如血液紅

色、組織勻漿等）

[注]：本法用分光光度計(jì) 530nm 處,1cm 光徑比色皿測(cè)得必須是

透光度值。

1、操作步驟

①、將配制好的應(yīng)用菌液，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液及所需檢測(cè)的樣本均

放入 37℃水浴箱中預(yù)溫 5 分鐘以上。使菌液，標(biāo)準(zhǔn)液

及檢測(cè)樣本的溫度達(dá)到 37℃。

②、將可見(jiàn)分光光度計(jì)于 530nm 處,1cm 光徑比色皿,以雙蒸

水調(diào)透光度 100% (比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)透光度

100%,一只用于測(cè)定)。

③、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入 0.2mL 待測(cè)樣本，取 2mL 應(yīng)

用菌液迅速?zèng)_入試管中，立即混勻并計(jì)時(shí)。(標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)

用液取 0.2mL,加入 2mL 應(yīng)用菌液,其它操作與測(cè)定相同)

④、迅速倒入比色皿中在可見(jiàn)分光光度計(jì) 530nm 處比濁，

15 秒時(shí)讀取透光度值 T0, 比色皿不要取出，在 2 分 15

秒時(shí)讀取透光度值 T2；

⑤、求出 2 次透光度的差值（△T= T2-T0）。

[注 1]：用同一比色皿每檢測(cè)一個(gè)樣本后均要用雙蒸水沖洗

干凈，才可再放第二個(gè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液。

[注 2]：當(dāng)測(cè)定管△T 大于 15 時(shí)，請(qǐng)將樣本稀釋后再測(cè)。

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