超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒

（測(cè)紅細(xì)胞）

一、試劑組成與配制：

二、紅細(xì)胞的前處理：

1、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（見(jiàn)附錄）或血紅蛋白測(cè)定（試劑本所有售）。

2、紅細(xì)胞溶血液的制備：

①、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備：取肝素抗凝全血，1000

轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄上層血清，留下層壓積紅

細(xì)胞，取一定量的壓積紅細(xì)胞，加 49 倍的雙蒸水，

例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中，混

勻，使其充分溶血，對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果

預(yù)試結(jié)果太高，再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行

預(yù)試后，再?zèng)Q定取樣濃度。

②、全血紅細(xì)胞溶血液的制備：取小鼠全血，輕輕搖勻，

取一定量的全血按照 1：24 的體積比加 24 倍雙蒸

水，制成 25 倍稀釋的溶血液，例如取 5ul 的全血

加雙蒸水 120ul 充分混勻，制成 25 倍稀釋的溶血

液。對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高，

再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后，再?zèng)Q定

取樣濃度。

[注 1]：制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測(cè)，否則易失活，因而必須在所有的

準(zhǔn)備工作做好以后再配制溶血液。

[注 2]：用不完的抗凝全血 4℃可保存 2～3 天， -20℃以下保存一周或者

更長(zhǎng)時(shí)間。

[注 3]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[注 4]：預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值（測(cè)定管吸光度值—對(duì)照管吸光度值）

控制在 0.2 左右為宜。

三、規(guī)范操作步驟：

1、酶促反應(yīng)：

附錄Ⅰ：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法，只需取其中一種即可以。

1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制：檸檬酸三鈉 3.8 克，甲醛 1mL，

雙蒸水 100mL，混勻，4℃保存。

②、取 1 支試管，加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL，取抗凝全血 10µL

加入試管稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試管顛倒數(shù)次

混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。（應(yīng)一次灌滿(mǎn)，而且不

要灌得太多。）

④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下，中央 5 個(gè)中

方格的紅細(xì)胞數(shù)，將數(shù)得的數(shù)字×10 10，即為每升血中

的紅細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù)：

取試管 1 支，加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL，再取 20µL

抗凝全血，加入 4mL 稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試

管顛倒數(shù)次混勻，立即倒入比色杯中，于 540nm，1cm 光

徑，雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色，記下吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐

標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。您可以不做曲線(xiàn)，用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲

線(xiàn)圖二（鼠紅細(xì)胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線(xiàn)）。根據(jù)標(biāo)

準(zhǔn)曲線(xiàn)查出紅細(xì)胞數(shù)。

3、用血紅蛋白（Hb）來(lái)?yè)Q算紅細(xì)胞數(shù)：

取 10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測(cè)試液（本所

有供應(yīng)）中，混勻，靜置 10 分鐘，于 540nm，1cm 光徑，

雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測(cè)得的吸光度乘以 367.7 即為血

紅蛋白的值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以

相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。您可以不做

曲線(xiàn)，用附錄Ⅱ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖一（鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅

蛋白數(shù)的換算曲線(xiàn)）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出紅細(xì)胞數(shù)。

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