ATP 酶測定試劑盒（測普通組織勻漿）

(貨號(hào)：A016-2 不高速可測 Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase)

此試劑盒可測不需要高速離心的紅細(xì)胞膜以及不需要高速離心的組織勻漿中的 ATP 酶。

一、試劑組成與配制(50 管/48 樣 A016-2-1)：

試劑一：液體 10mL×3 瓶，4℃保存 6 個(gè)月。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存 6 個(gè)月。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存 6 個(gè)月。

試劑四：粉劑×3 支，-20℃以下保存 6 個(gè)月。用時(shí)每支

加雙蒸水 5mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。余下的-20℃以下可

保存一周。

試劑五：粉劑×1 支，

4℃保存 6 個(gè)月。用時(shí)加雙蒸水 5mL，

適當(dāng)加熱溶解，4℃保存 3 個(gè)月。

試劑六：粉劑×1 支，4℃保存 6 個(gè)月。用時(shí)加雙蒸水

10mL[注 1]，充分加熱使其溶解，室溫保

存。

試劑七：液體 10mL×2 瓶，室溫保存 6 個(gè)月。

試劑八：粉劑×3 瓶，

4℃保存 6 個(gè)月。用時(shí)每瓶加水 40mL

溶解。(溶解后避光 4℃可保存一周)。

試劑九：粉劑×1 瓶，4℃保存 6 個(gè)月。用時(shí)加水 100mL

溶解，室溫保存 3 個(gè)月。

試劑十：2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶，室溫保存 6 個(gè)月。

試劑十一：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保

存 6 個(gè)月。0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：用

時(shí)將貯備液 20 倍稀釋，即取 0.5mL 加蒸餾水

定容至 10mL。

定磷劑的配制：按雙蒸水: 2.5mol/L 硫酸:試劑八:試劑九

=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃

色，若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，

定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

[注 1]：試劑六為過飽和溶液，所以在配制時(shí)最好用

90℃～100℃的熱蒸餾水 10.3mL(熱脹冷縮)邊

隔水加熱邊用玻璃棒攪拌，以使其充分溶解。

一次實(shí)驗(yàn)用不完再用時(shí)可能有結(jié)晶，用之前可

以再次邊隔水加熱邊玻璃棒攪拌使其溶解。

[注 2]： 配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，

也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

四、如果您的樣本很多可以采用簡便操作法：

測試前 A、B、C、D、E 五種混合試劑的配制：

根據(jù)規(guī)范操作表中 A、B、C、D、E 各管的試劑量

乘以您所需要測試的樣本數(shù)(n)再放寬 1～2 只的量(避

免吸到最后試劑量不夠)，然后縱向混合。 

六、測定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜

上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳

遞方面具有重要的作用。

七、測定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷，測定無機(jī)磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

八、注意點(diǎn)：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試

管要求嚴(yán)格，要沒有一點(diǎn)磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽

緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，

再用自來水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑

料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵。

2、定磷劑配好后，不可放置太久，一般保存一天，最好現(xiàn)

用現(xiàn)配。隨時(shí)放冰箱。

3、最好采用先配 A、B、C、D、E 五種混合液中的幾種，

然后按簡化操作步驟進(jìn)行檢測。這樣快捷、準(zhǔn)確。

4、所有配試劑的器皿均要專用，包括吸硫酸的吸管及盛水

的器皿，最好用新的。

5、本研究所有加厚的一次性塑料試管供應(yīng)，請?jiān)谟嗁徳噭?/span>

的同時(shí)訂購一次性塑料試管。

附錄Ⅰ：樣本前處理

一、樣本前處理：

1、全血的前處理：

①、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(詳見附錄Ⅱ)或血紅蛋白測定。兩者

只需測其中一樣。

②、洗滌紅細(xì)胞：取肝素抗凝全血 1mL，(若血樣較

少，則可以按一定比例減少血樣及各試劑的用

量。)加 4 倍左右的生理鹽水(0.86%NaCL 液)，

輕輕混勻，

1000～1500 轉(zhuǎn)/分，離心 5～10 分鐘，

棄上清留沉淀的紅細(xì)胞。

③、制備溶血液：在上述沉淀的紅細(xì)胞中加入 1.5mL

雙蒸水，將試管放在旋渦混勻器上混勻 30 秒，

放置 15 分鐘。再混勻 30 秒，再放置 15 分鐘，

使其充分溶血，直至溶液透亮。糖尿病大鼠的

紅細(xì)胞是不可以冰凍，否則越凍越不溶血。

④、取溶血液按操作表進(jìn)行 ATP 酶檢測和血紅蛋白

測定。

2、組織的前處理：準(zhǔn)確稱取組織重量按重量(g):體積

(mL)=1:9 的比例加入 9 倍體積的生理鹽水，冰

水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成 10%的勻漿液，

2500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，取上清 0.2mL加 0.8mL

生理鹽水稀釋成 2%的勻漿待測。(取得的上清

液同時(shí)測一下相應(yīng)樣本的蛋白濃度，總蛋白測

定試劑盒，本所有售，推薦 A045-2，考馬斯亮

蘭法)

3、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，離心，棄上

清，留下層細(xì)胞，用生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備

成 10 7 /cm3的懸液，即 10 7 /mL 的懸液，再進(jìn)行

破碎。破碎細(xì)胞的方法有三種：①、用勻漿器

勻漿。(可以用勻漿機(jī)，也可以用玻璃勻漿器手

工勻漿。)②、用進(jìn)口的超聲粉碎器粉碎。③、

反復(fù)凍溶 3 次。(第③種方法有時(shí)會(huì)影響酶活

力。)制備好的勻漿液不需要離心，在測試加樣

前要搖勻后取樣。(破碎好的勻漿液同時(shí)測一下

相應(yīng)樣本的蛋白濃度，總蛋白測定試劑盒，本

所有售，推薦 A045-4，BCA 法)

二、參考取樣量：

溶血液一般取 200μL，2%組織勻漿一般取 200μL，

細(xì)胞懸液一般取 200～300μL。如果您的樣本量很少，請

用超微量 ATP 酶檢測方法。

附錄Ⅱ：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法，只需取其中一種即可以。

(我所有制備好的曲線供您參考。)

1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制：檸檬酸三鈉 3.8 克，甲醛 1mL，

蒸餾水 100mL，混勻，4℃保存。

②、取 1 支試管，加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL，取抗凝全血

10µL 加入試管稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試管

顛倒數(shù)次混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。(應(yīng)一次灌滿，而且不

要灌得太多。)

④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下，中央 5 個(gè)中

方格的紅細(xì)胞數(shù)，將數(shù)得的數(shù)字×10 10，即為每升血

中的紅細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù)：

取試管 1 支，加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL，再取 20µL

抗凝全血，加入 4mL 稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，再將試

管顛倒數(shù)次混勻，立即倒入比色杯中，于 540nm，1cm 光

徑，蒸餾水調(diào)零進(jìn)行比色，記下吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐

標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線，用附錄Ⅲ的參考標(biāo)

準(zhǔn)曲線圖二(鼠紅細(xì)胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線)。根據(jù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

3、用血紅蛋白(Hb)來換算紅細(xì)胞數(shù)：

取 10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測試液中，混

勻，靜置 10 分鐘，于 540nm，1cm 光徑，蒸餾水調(diào)零進(jìn)

行比色。將測得的吸光度乘以 367.7 即為血紅蛋白的值。

以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)管的血紅

蛋白數(shù)為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線，用附錄

Ⅲ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一(鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白數(shù)的換算

曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

ATP 酶測定試劑盒（測普通組織勻漿）