全血乳酸（Lactic Acid LD）測(cè)定試劑盒

（測(cè)全血）

一、測(cè)定原理：

以 NAD+為氫受體，LDH 催化乳酸脫氫產(chǎn)生丙酮酸，使

NAD+轉(zhuǎn)化成 NADH。其中 PMS 遞氫使 NBT 還原為紫色呈

色物，呈色物的吸光度在 530nm 時(shí)與乳酸含量成線(xiàn)性關(guān)系。

二、試劑組成及配制（50 管/48 樣）：

蛋白沉淀劑：溶液 50mL×1 瓶，室溫保存 6 個(gè)月，如有結(jié)晶，

則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

試劑一：酶稀釋液 60mL×1 瓶，4℃～8℃冰箱保存 6 個(gè)月。

試劑二：酶貯備液 0.6 mL×1 支, 4℃～8℃冰箱保存 6 個(gè)月；

用時(shí)用一次性吸頭進(jìn)行取樣。

酶工作液的配制：臨用前將試劑二（酶貯備液）和試劑一

（酶稀釋液）按照 1︰100 的體積比進(jìn)行混合，現(xiàn) 用

現(xiàn)配，4℃保存 24 小時(shí)內(nèi)有效；

試劑三：顯色溶液 6 mL×2 瓶， 4℃～8℃避光冰箱保存 6

個(gè)月。

試劑四：粉劑×2 支，短期內(nèi)使用可放 4℃～8℃冰箱，長(zhǎng)

期（6 個(gè)月）存放請(qǐng)置-20℃以下。(注:粉劑量較少,

可能附著于管壁或蓋子上,并非空管,如使用時(shí)肉眼

不可見(jiàn),可將其 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 2 分鐘后使用)

顯色劑的配制：取 1 瓶試劑三，轉(zhuǎn)移 1mL 進(jìn)入一支試劑四

粉劑中, 反復(fù)顛倒離心管混勻,待粉劑溶解后，再用

微量移液器將離心管中的液體轉(zhuǎn)移到瓶中，再?gòu)倪@

瓶試劑三中移出 1mL 到原試劑四離心管中，如此反

復(fù) 2～3 次，使二者充分混合溶解，配成顯色劑，

2℃～8℃避光保存 2 周內(nèi)有效。

試劑五：終止液，60 mL×2 瓶， 4℃～8℃冰箱保存 6 個(gè)月。

試劑六：3mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)液，2 mL×1 支， 4℃～8℃冰箱保

存 6 個(gè)月。

三、操作步驟：

1、前處理：

上清液制備：取待測(cè)樣本 0.1mL,加入蛋白沉淀劑 0.6mL 混

勻，3500～4000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上

清液進(jìn)行測(cè)定。

[注]: 1、全血及時(shí)用蛋白沉淀劑制備成乳酸上清液。

2、制成的乳酸上清冰箱 4℃或者 0℃以下保存，

15～30 天穩(wěn)定不變。

3、如果您的血樣很少，您可以取 0.05mL 全血加

0.3mL 蛋白沉淀劑。

五、注意點(diǎn)：

1、應(yīng)取空腹或靜止?fàn)顟B(tài)下的靜脈血，并避免血液淤滯，如

用止血帶，應(yīng)在針頭刺入靜脈后馬上放開(kāi)，然后等 2 分

鐘后再抽血。

2、血液要新鮮，最好是當(dāng)天完成，如果當(dāng)天完不成，可將

樣本進(jìn)行樣本前處理后，將上清液 4℃或-20℃保存可穩(wěn)

定 15～30 天。

3、蛋白沉淀劑如有結(jié)晶, 則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

4、在批量實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定測(cè)定絕對(duì) OD（測(cè)

定 OD 值-空白 OD 值）在 0.05～0.35 之間。如果測(cè)定絕

對(duì) OD 小于 0.05，則需要加大樣本濃度重新測(cè)定；如果

測(cè)定絕對(duì) OD 大于 0.35，則需要將樣本稀釋后重新測(cè)定。

附錄Ⅰ：乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

1、前處理：

將 6mmol/L 的乳酸標(biāo)準(zhǔn)用雙蒸水稀釋成不同濃度：

1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L、6mmol/L，

進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備。（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)僅供參考，用戶(hù)可以不做，

而且 6mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)液本試劑盒不提供，如有需要請(qǐng)咨詢(xún)本公

司）

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